IL TEST DI PROLIFERAZIONE
a cura di Annamaria Colacci, Monica Vaccari,
Paola Silingardi, Wolfango Horn
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Questo saggio viene utilizzato
per verificare un eventuale effetto sul ritmo proliferativo imputabile
ad una tossicità ritardata o da accumulo dei composti.
Cellule in crescita esponenziale vrngono seminate in piastre e
incubate in condizioni di coltura standard. Come controlli negativi
vengono usate cellule non trattate e cellule trattate con il solo
solvente.
Le cellule vengono esposte due volte alla settimana all'agente
o a combinazioni di agenti, in corrispondenza dei cambi di mezzo
di coltura.
Le cellule vengono poi staccate con tripsina e contate ogni 24
ore fino ad oltre il raggiungimento della confluenza (fase di
plateau), per una durata complessiva di 2 settimane.
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Il
conteggio viene eseguito risospendendo le cellule in trypan
blue, colorante ad inclusione passiva, per ottenere un'ulteriore
indicazione sulla vitalità cellulare.
Le medie giornaliere di cellule vitali vengono riportate
in un grafico al fine di evidenziare alterazioni significative
del ciclo di crescita indotte dall'agente in saggio.
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